文献类型：会议

作　　者：齐欢 左代英 徐静雯 白兆石 李增强 吴英良

作者单位：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院药理毒理系

会议文献：2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议摘要汇编

会议名称：2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

会议日期：20150424

会议地点：中国辽宁沈阳

主办单位：中国工程院医药卫生学部;中国抗癌协会抗癌药物专业委员会;中国药理学会肿瘤药理专业委员会

出版日期：20150424

学会名称：中国抗癌协会

语　　种：中文

摘　　要：目的探讨结构稳定的新型Combretastatin A-4/Oltipraz杂合物COH-203诱导人肝癌HepG2细胞周期阻滞和凋亡的可能作用机制。方法 COH-203处理体外培养的HepG2细胞,MTT法及集落形成试验考察细胞的增殖情况;DAPI荧光染色以及透射电镜观察细胞的形态变化;体外微管聚合实验、免疫荧光染色以及蛋白免疫印迹方法检测微管和微丝骨架的变化;流式细胞技术、免疫荧光染色和western blot方法分析细胞周期及相关调控蛋白的变化和细胞凋亡的发生及其相关信号途径。结果COH-203可浓度和时间依赖地抑制HepG2细胞增殖,其IC值为0.083±0.011μM,且0.2μM的COH-203对HepG2细胞集落形成的抑制率为91.2%。体外微管聚合试验结果显示,COH-203可以浓度依赖地从分子水平直接抑制微管蛋白聚合,与阳性药CA-4效果相当;免疫荧光激光共聚焦结果显示,经COH-203（0.2μM）处理后的细胞,微管分布呈弥散状,断裂成多个小的片段,并出现了单级或多级纺锤体;随着微管的解聚,细胞内F-actin也呈弥散状,并逐渐聚集成颗粒状的F-actin小体,直至消失;同时细胞内解聚的微管蛋白及微丝蛋白表达水平均显著升高,而聚合的蛋白水平显著降低。PI单染-流式细胞结果显示,COH-203可时间和浓度依赖地诱导细胞G2/M期阻滞;M期标志性蛋白p.-histone H3（Ser 10）以及cyclin B1和p-cdc2（Thr161）蛋白水平显著升高,而p-cdc25c（Ser216）和p-cdc2（Thr14/Tyr15）显著下降,进一步证明了细胞是阻滞在M期。AnnexinV-PI双染-流式细胞、DAPI荧光染色以及透射电镜观察结果均显示,COH-203诱导HepG2细胞发生明显的凋亡,且凋亡率最高可达约80%。蛋白免疫印迹结果显示,线粒体途径相关蛋白Bax、Bad、caspase-9、胞浆内Cytochrome c水平明显上调,Bcl-2和Bcl-XL显著下调;死亡受体途径相关蛋白Fas、FADD和caspase-8均随着COH-203作用时间的延长而被激活;内质网应激途径标志性蛋白calpain-

关 键 词：COH-203  HEPG2 微管抑制剂 人肝癌

分 类 号：R96]