文献类型：会议

作　　者：陈瑶 田丽娜 张晓峰 刘铁连 韩亚丽 盛伟华 杨吉成 缪竞诚

作者单位：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

会议文献：Proceedings of 2011 International Conference on Biomedicine and Engineering（ISBE 2011 V4）

会议名称：2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

会议日期：20110804

会议地点：BaliIsland,Indonesia

主办单位：International Industrial Electronic Center, Hong Kong

出版单位：InternationalIndustrialEl...

出版日期：20110800

学会名称：智能信息技术应用学会

语　　种：中文

摘　　要：目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组腺病毒载体。ELISA法检测比较IRES及PolyA-promoter二个不同载体中目的基因的表达;同时结合兔角膜缘注射病毒诱导血管新生的结果,挑选出一个最佳Ang-1与VEGF165双基因共表达腺病毒载体。将此最佳双基因共表达腺病毒感染在再生丝素膜上培养的兔骨髓基质细胞,用荧光显微镜、RT-PCR及ELISA法检测VEGF165及Ang-1基因在兔骨髓基质细胞中的转录和表达;转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,检测角膜新生血管生长面积;HE染色及免疫组化法检测兔角膜层中血管密度及血管形成相关因子的表达。结果:（1）并成功获得了高效价的Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组病毒子。（2）ELISA法及兔角膜缘注射病毒法挑选与血管形成相关的最佳双基因腺病毒共表达载体Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1。（3）培养于再生丝素膜上生长的兔骨髓基质细胞经上述挑选的病毒感染后,将该转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,2周新生血管长入再生丝素膜植入区域的角膜内,新生血管维持1月以上,HE染色与免疫组化显示血管密度明显增多,CD34在兔角膜层中获得成功表达,与转Ad-GFP细胞修饰的再生丝素膜组和单纯再生丝素膜组比较呈显著性差异（P＜0.05）,由此证明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1转基因兔骨髓基质细胞修饰的丝素材料可促进血管生成。结论:成功构建并挑选出VEGF165和Ang-1最佳双基因共表达腺病毒载体,转VEGF165及Ang-1基因修饰的再生丝素膜有利于新生

关 键 词：再生丝素膜  血管生成素-1 血管内皮生长因子  腺病毒 转基因

分 类 号：R318.08[生物医学工程类]