文献类型：会议

作　　者：贺庆芝 廖端芳

作者单位：南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所

基　　金：国家自然科学基金资助(30470719,30600249);湖南省科技厅课题资助(04FJ4064);湖南省教育厅基金资助(99B11,04C539)

会议文献：湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编

会议名称：湖南省生理科学会2006年度学术年会

会议日期：20070112

会议地点：中国湖南长沙

主办单位：湖南省生理科学会

出版日期：20070112

学会名称：中国生理学会

语　　种：中文

摘　　要：目的探讨Daxx及相关蛋白在介导ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡中的作用。方法通过MTT比色法检测ox-LDL对RAW264.7细胞生长的影响;用AO/EB染色、流式细胞术和DNA断裂片段分析研究ox-LDL诱导的细胞凋亡;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况;Real time PCR检测细胞内Daxx mRNA、SREBP-1 mRNA的表达情况;Western-blot检测caveolin-1蛋白表达。结果用不同浓度（0、12.5、25、50、75mg/L）ox-LDL处理RAW264.7细胞48小时,随着药物浓度的增加,细胞活性下降明显,依次为103.2±16.35%;76.27±16.54%;56.49±11.94%;40.65±8.76%,ox-LDL在25mg/L时就对细胞活性产生明显的抑制作用（P<0.01）,IC值大约在50.6mg/L左右;50mg/L ox-LDL处理RAW264.7细胞48小时后,AO/EB染色细胞呈凋亡特征性改变（细胞核发桔红色荧光并伴有核固缩、碎裂）,DNA断裂片段分析显示凋亡特征性DNA梯形条带;流式细胞仪检测结果显示:0 mg/Lox-LDL处理RAW264.7细胞凋亡率为2.3%,用12.5、25、50、75mg/Lox-LDL处理RAW264.7细胞48小时,凋亡率分别为4.9%、8.6%、14.7%、33.1%,凋亡率呈明显的浓度依赖性变化（P<0.05）。50mg/L ox-LDL处理RAW264.7细胞48小时凋亡率为14.7%,随着时间的延长,凋亡率逐渐升高,72小时凋亡率为27.9%;油红0染色显示,50mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48小时后,细胞内有大量脂滴形成,细胞呈典型泡沫化状态;Real time PCR结果表明不同时间和不同浓度的ox-LDL处理RAW264.7细胞后,Daxx mRNA和SREBP-1 mRNA表达水平呈时间和浓度依赖性增加,其中50mg/L ox-LDL处理细胞48小时组均表达最高(Daxx mRNA由1.25×10上升至5.3×10、SREBP-1 mRNA由6.47×10上升至1.52×10);Western-blot显示caveolin-1蛋白表达呈时间依赖性下调。结论ox-LDL有诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡的作用,其机制可能与Daxx表达增高、SREBP-1和胆固醇流出有关。

关 键 词：相关蛋白 OX-LDL 凋亡率 RAW  细胞活性  巨噬细胞凋亡

分 类 号：R33]