文献类型：会议

作　　者：吴士筠 江瑜

作者单位：中南民族大学化学与生命科学学院生物技术国家民委重点实验室 中南民族大学化学与生命科学学院生物技术国家民委重点实验室

会议文献：湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编

会议名称：湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

会议日期：20041000

会议地点：中国武汉

主办单位：湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会

出版日期：20041000

学会名称：湖北省科学技术协会

语　　种：中文

摘　　要：Bal31核酸酶是海洋细菌A.espeJianaBal31在菌体外产生的酶,它具有从双链DNA的3’端和5’端同时水解两条链的作用。虽然它对两条链的降解速度不一定相同,但结果是双链从两头缩短,多半保留有单链末端,彻底水解产物为5’—单核苷酸。据文献记载,Bal31核酸酶对线性DNA的降解作用绝对依赖Ca(Ⅱ),但是我们发现Bal31核酸酶在无Ca(Ⅱ)存在的La(Ⅲ)体系中同样具有降解线性DNA的作用,其作用机制可能是由于La(Ⅲ)和Ca(Ⅱ)性:质相近,化学配位环境也相似,因此能够与Bal31核酸酶上的Ca(Ⅱ)结合位点相结合,从而诱导酶的构象发生改变,激活酶,进而能够与线性DNA相结合并降解之。关于稀土离子能够激活酶机理的报道,目前甚多,但有关Bal31核酸酶酶促反应动力学方面的研究尚未见报道。我们采用琼脂糖凝胶电泳的方法和HPLC技术对稀土离子La(Ⅲ)参与下的DNA酶解反应酶促反应动力学性质进行了研究。当La(Ⅲ)和Ca(Ⅱ)终浓度都为1mmol/L时的La(Ⅲ)体系和Ca(Ⅱ)体系在不同的时间段内,对含有相同浓度小牛胸腺DNA进行同步实验,到达时间点后用EGTA终止反应,将终止反应后的反应液进行琼脂糖凝胶电泳,根据电泳图谱来决定在进行酶促反应动力学研究中所应采取的最适反应时间。。再根据实验结果作双倒数图,据图求出在La(Ⅲ)体系和Ca(Ⅱ)体系中Bal31核酸酶的Km值与Vmax值。最后用HPLC解析在反应相同时间后,La(Ⅲ)体系和Ca(Ⅱ)体系酶解产物的异同。结果表明:(1)5-10分钟内,La离子对Bal31核酸酶的激活作用比Ca离子对Bal31核酸酶的激活作用强些,因此La(Ⅲ)体系降解DNA速度比Ca(Ⅱ)体系的快,由于DNA在10分钟内并没有完全降解,因此选择反应10分钟作为研究酶促反应动力学的最适反应时间。(2)1mmo工/LLa(Ⅲ)体系和1mmol/LCa(Ⅱ)体系中Bal31核酸酶的Km值分别为0.4546mol/L和0.7143mol/L,可见,1mmol/LLa(Ⅲ)激活Bal31核酸�

关 键 词：稀土 HPLC Ba131核酸酶  小牛胸腺DNA

分 类 号：Q936]