文献类型：会议

作　　者：鲁雅洁 魏钦俊 姚俊 陈智斌 邢光前 曹新

作者单位：[1]南京医科大学基础医学院医学遗传学系 [2]江苏省异种移植重点实验室 [3]南京医科大学基础医学院基础医学实验教学中心 [4]南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科

会议文献：2018中国遗传学会第十次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编

会议名称：2018中国遗传学会第十次全国会员代表大会暨学术讨论会

会议日期：20181126

会议地点：中国江苏南京

出版日期：20181100

学会名称：江苏省遗传学会

语　　种：中文

摘　　要：X连锁遗传性耳聋家系极为罕见,相比于其他孟德尔遗传方式,其相关的耳聋致病基因报道也数目极少。G蛋白偶联受体相关分选蛋白2（G protein-coupled receptor associated sorting protein 2,GPRASP2）是本课题组首次鉴定的X-连锁隐性遗传综合征型耳聋（Syndromic hearing loss,SHL）的致病基因,也是迄今报道的第二个该遗传方式的致聋基因。GPRASP2是GPRASPs家族成员之一,能够与几种G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors, GPCRs）,包括M1毒蕈碱型乙酰胆碱受体和降钙素受体相互作用,调节其活性。以往研究提示GPCRs以及GASPs功能异常主要与神经系统疾病、肿瘤以及免疫炎症等疾病的发生相关,与听觉功能相关性的研究迄今尚未见报道。本研究拟在前期工作的基础上,首先通过CRISPR/Cas9技术,设计靶向与人GPRASP2直系同源的小鼠Gprasp2基因的sgRNAs,通过显微注射C57B6/J小鼠胚胎,从而构建Gprasp2基因缺陷的小鼠动物模型。进一步通过定量PCR、免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）鉴定Gprasp2基因的敲除效率;应用听性脑干诱发点位（Auditory brainstem response, ABR）、声音信号恐惧测试方法检测基因敲除小鼠的听力表型;应用核磁共振（magnetic resonance imaging, MRI）观察基因缺陷型小鼠内耳结构变化;HE染色切片观察、免疫荧光铺片激光共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscopy,LSCM）和扫描电镜（Scanning electron microscope,SEM）观察小鼠耳蜗基底膜毛细胞超微结构变化;最后通过旷场实验（Open field test, OFT）、新奇抑制摄食实验（Novelty suppressed-feeding, NSF）、蔗糖偏好测试（Sucrose preference test, SPT）、悬尾实验（Tail suspension test, TST）和强迫游泳实验（Forced swimming test, FST）方法检测小鼠的行为学变化。结果表明,通过CRISPR/Cas9技术成功构建了Gprasp2基因缺陷型小鼠,定量PCR和IHC均显示小鼠的耳蜗组织中Gprasp2表达缺陷

关 键 词：X连锁遗传 综合征型耳聋  Gprasp2  耳蜗 动物模型

分 类 号：R764.43] R332[临床医学类]