文献类型：会议

作　　者：张燊 肖希龙

作者单位：中国农业大学动物医学院药理与毒理教研室

会议文献：中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议论文集

会议名称：中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

会议日期：20120901

会议地点：中国北京

主办单位：中国毒理学会

出版日期：20120900

学会名称：中国毒理学会

语　　种：中文

摘　　要：【目的】细胞的自噬是指细胞内内容物被双层膜形成的自噬小体包裹,并运送到溶酶体形成自噬溶酶体降解内容物的过程。自噬可清除受损或多余的蛋白质及细胞器,对于细胞保持稳态具有重要意义,尤其在细胞发生应激时的生存机制中起决定性作用。自噬常作为细胞的保护性机制发挥作用,但强烈、持续发生的自噬过程可导致细胞死亡。真核细胞中,内质网参与蛋白质合成、修饰及运输过程,且为细胞内钙离子的储存场所。多种物理性及病理性刺激能导致内质网平衡的紊乱,即"内质网应激"。内质网上待折叠修饰蛋白过载,造成非折叠蛋白在内质网中累积被称为"错误折叠蛋白反应(UPR)"。内质网应激会引起从内质网到细胞质和细胞核的信号传导,最终帮助细胞恢复稳态并得以存活。研究显示UPR信号通路被强烈激活时,为清除内质网中累积的过多错误折叠蛋白,细胞内自噬可能被上调,过于严重的内质网应激也可能导致细胞发生自噬性死亡。调控这一过程的分子机制至今知之甚少。本实验目的在于研究衣霉素对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响及诱导内质网应激介导的自噬作用。【方法】以N-糖链抑制剂衣霉素(tunicamycin,Tm)作用于人肝癌细胞系HepG2建立内质网应激模型,同浓度的Tm溶剂DMSO药液作为对照组。用不同浓度、不同时间的Tm作用于HepG2细胞,通过MTT实验测定Tm对HepG2细胞存活率的影响;通过单丹酰戊二胺(MDC)实验检测Tm作用HepG2细胞诱导的自噬现象;通过Western Blot检测LC3-I/LC3-Ⅱ,Beclin-1,p-PERK,DAPK,p-JNK蛋白分子的表达情况,检测内质网应激和自噬的发生。【结果】Tm可降低HepG2细胞的存活率,并随时间、剂量增加效应增强;Tm作用浓度大于5ug/ml,作用时间大于4h时,HepG2细胞内自噬小泡数量呈浓度-时间依赖性增加;Tm作用2-6h内p-PERK蛋白量呈浓度-时间依赖性上调,LC3-Ⅰ/LC3

关 键 词：衣霉素 HEPG2细胞 内质网应激  自噬

分 类 号：R735.7] R965[临床医学类]