文献类型：会议

作　　者：赵宁宁 温振国 车耀进 吴灵群 许云禄

作者单位：[1]福建医科大学蛇毒研究所 [2]福建医科大学免疫治疗研究所

会议文献：第12届生物毒素研究及医药应用学术大会论文集

会议名称：第12届生物毒素研究及医药应用学术大会

会议日期：20151009

会议地点：中国陕西延安

主办单位：中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会;中国生物化学与分子生物学会天然毒素专业委员会

出版日期：20151009

学会名称：中国毒理学会

语　　种：中文

摘　　要：解离素（Disintegrin）作为天然的整合素拮抗剂主要存在于蛇毒或水蛭毒素中,通过其分子中RGD三肽基序能够竞争性阻断整合素与其配体结合,整合素与其配体细胞外基质蛋白如层粘连蛋白、纤维粘连蛋白、胶原、玻连蛋白、血小板反应蛋白、骨桥蛋白等结合并发挥作用,参与许多生理病理过程,如免疫反应、炎症、凝血、组织修复、肿瘤浸润、受精、胚胎植入及其生长发育等,是就有良好新药潜质的化合物。蝮蛇毒中天然解离素含量较低,从粗毒中分离解离素且耗时耗力,得率较低。此外,由于市售蛇毒因产地、季节、收集人及收集工艺不同,质量参差不齐。本课题利用基因工程的方法对解离素进行克隆表达,获得大量重组解离素可以使其来源不受自然条件的限制,进而可进行规模的生产,为药物的研发奠定良好的基础。1天然江浙短尾蝮蛇蛇毒解离素的分离纯化应用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换色谱、Superdex 75和Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离纯化得到天然解离素,由70个氨基酸组成,其中含RGD三肽基序和12个半胱氨酸形成6对分子内二硫键,符合中链解离素特征。2 SDS-PAGE（Tris-Tricine系统）碱性不连续电泳通过SDS-PAGE碱性不连续电泳在分离过程中对各峰分子量测定,解离素的分子量约为7.7kD。3天然江浙短尾蝮蛇蛇毒解离素的生物学活性测定采用比浊法,测定天然解离素对ADP诱导的体外血小板聚集的作用。结果显示,解离素对ADP诱导的体外血小板聚集具有明显的抑制作用,且呈量效关系。4重组质粒的构建及鉴定设计Disintegrin-Fc融合蛋白序列、酶切位点,引物等,使目的序列能够在pCMV-DHFR,pEE17.4两个质粒间进行穿梭,通过测序、酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳对目的片段鉴定。5重组质粒的转染、表达及纯化重组质粒瞬时转染293FT,初步考察目的基因的表达情况及生物活性,之后�

关 键 词：解离素 Disintegrin-Fc融合蛋白  克隆表达  分离纯化  

分 类 号：Q78]