文献类型：会议

作　　者：刘宇飞 华秋翰 李美珍 曾晖娴 李雪琪 陈威 蒋义国

作者单位：广州医科大学公共卫生学院化学致癌研究所呼吸疾病国家重点实验室

会议文献：中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会论文摘要集

会议名称：中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会

会议日期：20201204

会议地点：中国广东广州

出版日期：20201200

学会名称：中国毒理学会

语　　种：中文

摘　　要：目的探讨NNK暴露对人支气管上皮细胞16HBE的增殖影响,以及环状RNA在其中的调控作用。方法采用不同浓度的NNK （0μM,50μM,100μM,200μM,300μM）对16HBE细胞进行48h染毒。通过CCK-8和EdU实验检测每组细胞的增殖活性,经流式细胞术分析每组细胞的周期分布情况,通过生物信息学预测细胞增殖调控相关的circRNA,经qRT-PCR验证并挑选NNK暴露细胞中差异表达最为显著的circRNA。RNase R酶处理16HBE细胞总RNA后,结合qRT-PCR检测circRNA的稳定性。敲减和过表达circRNA后,分别使用CCK-8和EdU实验检测16HBE细胞的增殖活性,经流式细胞术分析细胞周期分布的改变情况。结果不同浓度NNK处理16HBE细胞48h后,与对照组相比,随NNK染毒浓度增加,CCK-8吸光度呈剂量依赖性降低,EdU实验结果显示,300μMNNK染毒组的细胞增殖抑制率最高。流式细胞术检测发现,NNK处理导致16HBE细胞G2/M期的细胞百分比剂量依赖性增加。生物信息学预测筛选和qRT-PCR验证后发现,环状RNA circNIPBL在NNK暴露细胞中表达上调最为明显。RNase R酶处理仅使该circRNA的丰度小幅降低。敲减circNIPBL后,CCK-8实验结果表明NNK染毒后的细胞增殖抑制减轻,EdU实验也发现circNIPBL敲低后,增殖细胞阳性率也随之升高。流式检测结果显示,NNK暴露所致G2/M期阻滞随circNIPBL敲降而减轻。而circNIPBL过表达后,CCK-8实验显示NNK暴露所致细胞增殖抑制进一步加重,EdU实验也得到一致结果,流式细胞术则显示NNK暴露所致G2/M阻滞加重。结论较高浓度NNK暴露可引起细胞周期G2/M期阻滞,从而抑制16HBE细胞的增殖活性,circNIPBL可通过调节细胞周期进展,加重NNK暴露所致的16HBE细胞增殖抑制。

关 键 词：NNK 环状RNA  circNIPBL  细胞增殖 细胞周期

分 类 号：R114]