文献类型：会议

作　　者：陈威 陈泽豪 贾阳阳 郭耀铮 郑丽婷 姚树为 蒋义国

作者单位：广州医科大学公共卫生学院化学致癌研究所

会议文献：中国毒理学会第十次全国毒理学大会论文集

会议名称：中国毒理学会第十次全国毒理学大会

会议日期：20230408

会议地点：中国广东珠海

出版日期：20230400

学会名称：中国毒理学会

语　　种：中文

摘　　要：目的探索六价铬暴露后对人支气管上皮细胞DNA损伤修复水平以及circRNA表达谱的影响,分析circRNA在六价铬致人支气管上皮细胞DNA损伤中的作用与分子机制。材料和方法采用不同浓度的KCrO暴露人支气管上皮细胞系16HBE和BEAS-2B细胞24 h和48 h,采用碱性彗星实验检测KCrO对人支气管上皮细胞(16HBE和BEAS-2B细胞)DNA链断裂的影响,采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测DNA损伤指示蛋白γ-H2AX的表达水平,并用免疫荧光实验检测浓度梯度KCrO暴露后细胞γ-H2AX焦点数的形成情况。采用全转录组测序分析KCrO暴露后的差异性表达circRNAs,并用qRTPCR对其进行验证。采用双荧光素酶报告基因检测circRNA与miRNA的结合情况,采用原位杂交实验(FISH)对circRNA与miRNA进行细胞共定位。结果彗星实验结果显示,KCrO处理后细胞DNA损伤增加,免疫荧光实验结果显示KCrO处理后细胞核内γ-H2AX焦点增多,蛋白免疫印迹实验结果显示,KCrO处理后细胞γ-H2AX蛋白表达增加。另外,选择最合适的KCrO剂量进行细胞处理。发现Circ008657在KCrO染毒后表达水平显著上调。通过敲低circ008657成功降低了KCrO诱导的DNA损伤,而过表达circ008657则具有相反的作用。机制上,circ008657与miR-203a-3p共同定位于细胞质中并且相互结合,共同调控miR-203a-3p下游同源重组修复的关键蛋白ATM,从而调控KCrO诱导的DNA损伤。结论 KCrO暴露可引起人支气管上皮细胞发生明显DNA损伤及circ008657表达水平显著上调,机制上,我们的研究证明了circ008657可与miR-203a-3p竞争性结合,激活ATM通路,调控环境污染物暴露后细胞的DNA损伤应答。

关 键 词：环状RNA  铬  DNA损伤 DNA修复

分 类 号：R994.6]