文献类型：会议

作　　者：蒋承建 胡婷婷 武波

作者单位：广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室 广西亚热带资源保护利用重点实验室 广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室 广西亚热带资源保护利用重点实验室 广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室 广西亚热带资源保护利用重点实验室

会议文献：第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集

会议名称：第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会

会议日期：20061000

会议地点：中国湖北武汉

主办单位：中国遗传学会微生物遗传学专业委员会

出版日期：20061000

学会名称：中国遗传学会

语　　种：中文

摘　　要：近年来,环境体系宏基因组文库的构建为新型生物活性物质的筛选工作提供了丰富的直接的自然资源来源。本研究工作从碱性自然环境中采集土壤,直接提取纯化土壤宏基因组DNA,利用大肠杆菌作为宿主细胞构建质粒宏基因组文库,采用酶活性筛选策略分离得到了一种新型的L-半胱氨酸脱羧酶。编码新型 L-半胱氨酸脱羧酶的基因被命名为undfp1A,该基因由1077个核苷酸序列构成, 编码由359个氨基酸组成的大小为38 kDa的蛋白质。Llndfp1A蛋白在含有CMC 的筛选平板上表现脱羧酶活性。该酶与来自Porphyromonas gingivalis W83的一种磷酸式泛酰巯基乙胺半胱氨酸脱羧酶有56％的相似性。Undfp1A氨基酸序列的分析比较揭示了Undfp1A蛋白和属于HFCD家族的蛋白具有相似的黄素蛋白结合模式,保守的活性位点和半胱氨酸脱羧酶残基位点,因此,我们将Undfp1A 蛋白鉴定为HFCD蛋白家族的新成员。我们进一步在大肠杆菌系统中过量表达了 Undfp1A蛋白并最终纯化出了目标蛋白并进行了深入的酶学性质研究。HPLC实验结果证实了L-半胱氨酸在Undfp1A蛋白作用下脱羧后形成了脱羧产物半胱胺。该酶的最佳作用温度为32℃,最佳作用pH值为6．0。进一步的研究显示, Undfp1A蛋白具有明显的HFCD蛋白家族底物结合簇序列特征。将Undfp1A的 His-30突变成Asn将导致整个基因的失活;将保守的底物结合簇ACGD模式序列中的丝氨酸残基Ser-113突变成Arg将导致Undfp1A失去大部分活性。

关 键 词：宏基因组文库 L-半胱氨酸脱羧酶  HFCD蛋白家族  半胱胺

分 类 号：Q78]