文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201010505326.1

申 请 日：20101013

发 明 人：姜正军 陈溥言 袁永 苏晓明 朱孟豪 田建国 王希凤 孙大明

申 请 人：山东华辰生物科技有限公司

申请人地址：262610 山东省潍坊市高新区金马路516号

公 开 日：20130102

公 开 号：CN101979649B

代 理 人：赵会祥

代理机构：37219 济南金迪知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及一种利用溶氧参数控制毕赤酵母发酵生产抗菌肽的方法，属于生物工程技术领域。步骤如下：(1)标定溶氧(DO)的百分点，得到发酵培养基；(2)同时标记为0点，开始发酵；(3)当DO值由10％以下上升至50％以上时，开始流加甲醇至DO值回落至10％～30％，停止流加甲醇，当DO值再次稳定升高至50％以上时，再次开始流加甲醇至DO值回落至10％～30％，停止流加甲醇，循环操作，通过流加甲醇、调节通风和转速控制DO值始终维持在10％～30％；(4)当流加甲醇后DO值不再回落时，发酵结束。本发明所述方法发酵周期短，甲醇用量少，相比传统溶氧值调控，更易于操作，条件易于掌握。

主 权 项：1. 一种利用溶氧参数控制毕赤酵母发酵抗菌肽的生产方法，其特征在于，步骤如下： （1）向发酵罐中加入0.5%甲醇的BMMY培养基或1%甘油的BMGY培养基，实消并冷却后，调节发酵温度为27～30℃，在通气量为0.3～1.5vvm、搅拌速度为250～400rpm的条件下，标定溶氧的百分点，得到发酵培养基； （2）将基因工程酵母菌在含有博莱霉素抗性的YPDS液体培养基进行摇床活化，培养条件为28～30℃，100～200rpm，培养20～26小时，以OD₆₅₀不超过4为限度； 将上述活化后的基因酵母菌株以体积百分比2%的接种量接入到BMGY培养基中，在摇床中进行菌体的富集，培养条件为28～30℃，150～200rpm，培养过夜即可，培养结束后，得种子液，等待接种使用，或放置于冰箱4度存放，但不可超过三天； 然后将基因酵母菌株接种于发酵培养基中，接种量为10%(v/v)，同时标记为0点，开始发酵，发酵条件为：通气量为0.3～1.5vvm、搅拌速度为100～400rpm、罐压为0.02～0.1MPa； （3）当DO值由10%以下上升至50%以上时，开始流加甲醇至DO值回落至10%～30%，停止流加甲醇，当DO值再次稳定升高至50%以上时，再次开始流加甲醇至DO值回落至10%～30%，停止流加甲醇，循环操作3～6次，通过流加甲醇、调节通风和转速控制DO值始终维持在10%～30%； （4）当流加甲醇后DO值不再回落时，发酵结束； 所述步骤（2）中含有博莱霉素抗性的YPDS液体培养基组分如下： 酵母浸粉 10g/L、蛋白胨 20g/L、葡萄糖20g/L、山梨糖醇1mol/L、博来霉素25ug/ml； 所述步骤（3）中流加甲醇的量为培养基中甲醇终浓度不超过0.2%（v/v）； 所述步骤（3）中流加甲醇时DO值回落至大于30%时，通过降低搅拌转速和/或降低通风量来调节DO值，但通风量不低于0.3vvm；DO值回落至小于10%时，通过提高搅拌转速和/或提高通风量来调

关 键 词：甲醇 溶氧 发酵 生物工程技术 发酵培养基  毕赤酵母 参数控制  发酵生产 发酵周期  甲醇用量  同时标记  循环操作  转速控制  抗菌肽 标定  停止  通风  调控  

IPC专利分类号：C12P21/00(20060101);C12R1/84(20060101)