文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201110378653.X

申 请 日：20111124

发 明 人：尹晓光

申 请 人：吉林省拓华生物科技有限公司

申请人地址：136000 吉林省四平市铁西区南迎宾街89号

公 开 日：20140416

公 开 号：CN102399747B

代 理 人：王淳

代理机构：11100 北京北新智诚知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及一种神经干细胞的传代分离方法，其步骤为：a.在含有DMEM/F 12培养基无菌平皿中生长的神经干细胞神经球，经过1000rpm离心后，用毛玻璃挤压研磨后，将细胞用无菌不锈钢网过滤；b.将细胞稀释到1×10<Sup>7</Sup>个/mL，置于5％CO<Sub>2</Sub>培养箱中继续培养，连续培养1-2天，得到新生的神经干细胞神经球。通过本发明的传代分离方法，获得的小神经球大小均匀。对神经干细胞和神经前体细胞损伤小，体外传代时间长，并且无贴壁分化的神经细胞。

主 权 项：1.一种神经干细胞的传代分离方法，其特征在于，步骤如下：a.将神经干细胞神经球经过离心后，用毛玻璃片挤压研磨神经干细胞神经球，再经不锈钢网过滤；b.将过滤后的细胞稀释到1×10⁷个/mL，置于5%CO₂培养箱中继续培养，连续培养1-2天，得到新生的神经干细胞神经球；其中，所述的毛玻璃片的制备方法为：a.取2块玻璃板，将其中一块玻璃板平放在容器中，在其上表面均匀涂布金刚砂砂粒，所述砂粒的粒径大小为：0.1～1毫米；b.于玻璃板的上表面滴加氢氟酸，使砂粒间充满液体；c.取另一块玻璃板压在金刚砂粒层上面，用手按压上层玻璃板并作环形研磨；d.研磨数分钟后，将两块磨好的毛玻璃板用清水冲洗，用玻璃刀分别从两块毛玻璃板的未研磨面切下，将毛玻璃板切割成所述的毛玻璃片。

关 键 词：神经干细胞 神经球 分离方法  无菌  神经前体细胞 神经细胞 不锈钢网  连续培养  细胞稀释  培养基  研磨  毛玻璃  培养箱 体外  过滤  挤压  损伤  细胞 生长  新生  培养  

IPC专利分类号：C12N5/0797(20100101)