文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201010264218.X

申 请 日：20100827

发 明 人：刘钿莲 刘丹 艾文

申 请 人：丽珠集团疫苗工程股份有限公司

申请人地址：519045 广东省珠海市金湾区小林镇商都街6号国土综合楼5003房

公 开 日：20140205

公 开 号：CN102327609B

代 理 人：曹津燕

代理机构：11280 北京泛华伟业知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明提供一种乙型脑炎疫苗的生产方法，该生产方法包括以下步骤：将Vero种子细胞加入300升生物反应器中，与微载体一起进行灌流培养；灌流培养5～6天后，沉降微载体和细胞，以维持液替换培养基，接种乙型脑炎病毒继续进行灌流培养；收集病毒培养液，过滤、灭活并纯化。上述方法使得用于生产的细胞密度提高，大大提高了生产能力，实现大规模、高密度培养；消除了产品批次间差异和培养周期的不稳定性，保证产品的质量稳定均一，提高了产品质量；解决了生物反应器放大培养工艺的难题，实现了生物反应器高密度、大规模培养哺乳动物细胞。

主 权 项：1.一种乙型脑炎疫苗的生产方法，该生产方法包括以下步骤：（1）将Vero种子细胞加入300升生物反应器中，与微载体一起进行灌流培养，其中培养基包含9.55g/L的M199培养基、2.2g/L的NaHCO₃、1.5g/L的葡萄糖、0.2g/L的谷氨酰胺以及10%体积/体积的胎牛血清；培养条件包括：搅拌速度为35～40转/分，pH为7.2～7.4，溶解氧为40～50%饱和度，温度为36.5～37.5℃，培养基的灌流速度为315升/天；（2）灌流培养5～6天后，沉降微载体和细胞，以维持液替换培养基，按照感染复数为0.01接种乙型脑炎病毒继续进行灌流培养，其中维持液包含9.55g/L的M199培养基，2.2g/L的NaHCO₃，1.0g/L的蔗糖以及0.1g/L的人血白蛋白；培养条件包括：搅拌速度为35～40转/分，pH为7.5～7.6，溶解氧为40-50%饱和度，温度为33.5-34.5℃，维持液的灌流速度为315升/天；（3）收集病毒培养液，过滤、灭活并纯化。

关 键 词：生物反应器  灌流培养  微载体 哺乳动物细胞 乙型脑炎病毒 乙型脑炎疫苗 病毒培养液  高密度培养  培养工艺  培养周期  细胞密度 质量稳定  种子细胞 培养基  沉降  高密度  接种  过滤  放大  细胞 培养  

IPC专利分类号：A61K39/12(20060101);C12N7/04(20060101);A61P31/14(20060101);C12R1/93(20060101)