文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201110277681.2

申 请 日：20110919

发 明 人：邹检平

申 请 人：北京健平金星生物科技有限公司

申请人地址：100085 北京市海淀区上地开拓路5号中关村生物医药园A204室

公 开 日：20141015

公 开 号：CN102426240B

代 理 人：毛燕生

代理机构：11255 北京市商泰律师事务所

语　　种：中文

摘　　要：一种检测人血管内皮生长因子（VEGF）的酶联检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：VEGF受体及单克隆抗体联合包被的酶联反应板、辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体加保护剂配置的酶结合物、作为阳性对照的VEGF蛋白的冻干粉、作为阴性对照的蛋白冻干粉、样品稀释液、PBST浓缩洗液、3，3＇,5,5＇-四甲基联苯胺配置的显色底物、作为终止液的2MH2SO4、封板胶纸。本试剂盒可用于癌症、血管病、糖尿病视网膜病及类风湿关节炎的诊断和预后，具有准确、特异、灵敏、稳定、方便等优点。

主 权 项：1.一种酶联检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述酶联检测试剂盒的组成为：酶联板、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、酶联物、浓缩洗涤液、显色剂A&B、终止液和封板胶纸；其中：酶联板为血管内皮细胞生长因子受体及单克隆抗体联合包被的酶联反应板；阳性对照为血管内皮细胞生长因子蛋白冻干粉；阴性对照为动物血清冻干粉；样品稀释液为0.05％吐温-20，1％牛血清白蛋白，10mM乙二胺四乙酸二钠，0.05％硫柳汞，0.4MNaCl，pH6.5；浓缩洗涤液为137mM NaCl,2.7mM KCl，10mM Na₂HPO₄，2mM KH₂PO₄，0.05％吐温-20，pH7.4；显色剂A、B，其中A液为H₂O₂溶液，B液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液；终止液为2M H₂SO₄；酶联物为辣根过氧化物酶标记血管内皮细胞生长因子单克隆抗体，该单克隆抗体通过如下步骤进行制备、纯化及标记：以小鼠为免疫动物，重组VEGF为抗原进行免疫，根据小鼠免疫效价，挑选免疫效价最高的动物，取脾脏进行细胞融合，采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞株的筛选，挑选有一个细胞团的阳性孔进行有限稀释，一个孔中只有此一个克隆细胞团，中央密集成圆形向四周铺开，待有限稀释的所有的孔皆如此且全部检测为阳性，可认为克隆完成，由其中单一细胞来源的杂交瘤分泌所得到的抗体为单克隆抗体，正辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体，纯度在95％以上，采用戊二醛法将辣根过氧化物酶(HRP)标记到VEGF单克隆抗体上；其中，该酶联检测试剂盒的制备方法包括以下主要步骤：(a)将基因工程表达的血管内皮细胞生长因子受体及单克隆抗体包被于固体支持物酶联反应板上；(b)用封闭液封闭；其中，步骤(a)所述的单克隆抗体是用血管内皮细胞生长因子免疫小鼠所�

关 键 词：试剂盒  血管内皮生长因子  辣根过氧化物酶 糖尿病视网膜病 类风湿关节炎  单克隆抗体  蛋白冻干粉  甲基联苯胺  检测试剂盒  酶联反应板  样品稀释液  诊断和预后  阳性对照 阴性对照 保护剂  检测人  结合物  血管病 干粉  底物  胶纸  抗体  洗液  显色  灵敏  蛋白 癌症  浓缩  终止  

IPC专利分类号：G01N33/577(20060101); G01N33/531(20060101)