文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201310727858.3

申 请 日：20131226

发 明 人：冯民 王小晋 匡华 孔德昭 胥传来 徐丽广 马伟 刘丽强

申 请 人：中华人民共和国淮安出入境检验检疫局 江南大学

申请人地址：223021 江苏省淮安市北京北路32号

公 开 日：20140409

公 开 号：CN103713104A

代 理 人：时旭丹;刘品超

代理机构：32104 无锡市大为专利商标事务所

语　　种：中文

摘　　要：一种检测食品中阪崎肠杆菌的双抗体夹心法，属于免疫分析领域。本发明应用阪崎肠杆菌(ATCC29544)，及阪崎肠杆菌ATCC29544耦联BSA提取的LPS分别为免疫原同时免疫BALB/c小鼠，经免疫、融合、筛选得11株阪崎肠杆菌单抗，分别标记HRP并以阪崎肠杆菌进行两两配对。以7号单抗CGMCCNo.7207为包被抗体，8号单抗CGMCCNo.7208为酶标抗体，以ATCC29544为标准品建立了阪崎肠杆菌的夹心ELISA法，LOD为53000CFU/mL。本发明采用理化性质高那均一、特异性好、可大量制备的单抗，建立的夹心法灵敏度高，成本低，与肠炎沙门氏菌、E.coli、E.coliO157:H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌无交叉反应，为食品中阪崎肠杆菌的检测提供了快速高效的分析手段。

主 权 项：1.一种基于单克隆抗体的检测食品中阪崎肠杆菌的双抗体夹心法，其特征在于步骤为： （1）单克隆抗体的制备     以阪崎肠杆菌ATCC 29544菌体及耦联BSA的阪崎肠杆菌提取的LPS分别做为免疫原，同时免疫 8周龄的BALB/c小鼠，进行免疫、融合、筛选，共筛选到11个细胞株； （2）单克隆抗体的配对筛选 将纯化后的11株单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP，直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对，配对参数如下：包被抗体2μg/mL；包被液为pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液；标品浓度10^8cfu/mL；标品稀释液pH7.2、0.01M的PBS；酶标抗体稀释500倍使用，在此条件下，实验成功得到了8对P/N值>5的配对； （3）夹心法的建立 选择检测限稳定、灵敏的配对，即以CGMCC No.7207为包被抗体，CGMCC No.7208为酶标抗体建立夹心法；具体参数如下： 抗体包被浓度：2μg/mL， 包被液：pH9.6、0.01M碳酸盐缓冲液， 标品稀释液：含0.2% Tween 的pH7.2、0.01M的PBS， 检测抗体浓度：2.5μg/mL， 反应时间：包被、封闭：37℃，2h；标准品：37℃，1h；检测抗体37℃，1h；显色10min； 优化后阪崎肠杆菌夹心法的LOD为53000 CFU/mL。

关 键 词：杆菌  抗体 金黄色葡萄球菌  鼠伤寒沙门氏菌 肠炎沙门氏菌 抗体夹心法  分析手段  交叉反应  理化性质  免疫分析  标准品  灵敏度  免疫原  检测  菌无  酶标  耦联  配对  筛选  融合  

IPC专利分类号：G01N33/02(20060101);G01N33/577(20060101)