文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201310457212.8

申 请 日：20130930

发 明 人：吴胜昔 吴玉章 曾政 熊仲良 蔡家利 梁望旺 蔺露 董春霞

申 请 人：重庆理工大学 中国人民解放军免疫学研究所 重庆市动物疫病预防控制中心

申请人地址：400054 重庆市巴南区李家沱红光大道69号

公 开 日：20150513

公 开 号：CN103536912B

代 理 人：张先芸

代理机构：50212 重庆博凯知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及一种猪圆环病毒2型表位肽疫苗及其制备方法。该疫苗含有三种B细胞表位，其赖氨酸为核心基质构建表位单体相同的四分支肽，并串联一个通用T辅助细胞（Th）表位，分子量为13kDa，该表位肽命名为PCV CP<Sub>98-156-228</Sub>；该疫苗免疫小鼠后产生较强的免疫应答，产生高效价的病毒中和性抗体。本发明的表位肽疫苗具有价廉、安全、特异性强、容易保存和应用的优点，将在防控猪圆环病毒病发挥重要作用。本发明方法通过表位肽的预测、筛选，表位肽疫苗的设计，表位肽的合成、纯化及鉴定，以及表位肽疫苗的制备四个步骤制备出一种猪圆环病毒2型（PCV2）表位肽疫苗，该方法原料易得、成本较低、容易控制，具有较好的操作性，适应推广应用。

主 权 项：1.一种猪圆环病毒2型表位肽疫苗，其特征在于，该疫苗含有三种B细胞表位，其赖氨酸为核心基质构建表位单体相同的四分支肽，并串联一个通用T辅助细胞（Th）表位，分子量为13 kDa，该表位肽命名为PCV CP_98-156-228；所述三种B细胞表位具体氨基酸序列如下：B98 IRKVKV，B156 YHSRYFT，B228 DPPLNP；所述表位肽结构如下：                                    其制备方法，包括如下步骤：1） 表位肽的预测、筛选：选用PCV2b CAP蛋白作为候选抗原，对其氨基酸序列采用BcePred 和DNAStar软件进行B细胞表位预测；结合PCV2b CAP B细胞表位，筛选出3种抗原指数较高的表位，即98-103aa，命名为B98 ； 156-162aa，命名为B156 ；228-233aa，命名为B228；3种表位具体氨基酸序列如下：B98 IRKVKV，B156 YHSRYFT，B228 DPPLNP；2）表位肽疫苗的设计：以步骤1）所选序列为基础，赖氨酸为核心基质构建表位单体相同的四分支肽，同时串联一个通用型Th表位，该表位肽命名为PCVCP_98-156-228，结构式如上；3）多肽的合成、纯化及鉴定：用多功能多肽合成仪分别合成表位肽PCV CP_98-156-228，对其进行质谱检测，高效液相色谱检测纯度；4）表位肽疫苗的制备：首先，将上述步骤3）合成的表位肽PCV CP_98-156-228用0.01M, pH7.4 PBS稀释到100ug/ml，过滤，制得水相；然后，选择油乳剂在121℃下灭菌15min得到油相；所述油乳剂为Span-80，Tween-80或Arlacel-80中的一种；再之，在乳化器中加入油相，在80-100r/min下搅拌2min后，加入同等质量的水相采用8500r/min的速度搅拌6min，制得油包水乳剂；最后，将所得油包水乳剂在无菌条件下定量分

关 键 词：表位  疫苗  圆环病毒 种猪 病毒中和性抗体  纯化及鉴定  辅助细胞 核心基质  免疫应答  疫苗免疫  制备方法  高效价 赖氨酸  防控  串联  筛选  细胞 命名  

IPC专利分类号：A61K39/12(20060101);C07K19/00(20060101);C07K1/06(20060101);C07K1/04(20060101);A61P31/20(20060101)