文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201410521927.X

申 请 日：20140930

发 明 人：刘琦 郑新 赵金银 郭丽萍 许立志 其他发明人请求不公开姓名

申 请 人：大连晶泰生物技术有限公司

申请人地址：116635 辽宁省大连市大连经济技术开发区先进装备制造业园区金七路9-2号

公 开 日：20160427

公 开 号：CN105524983A

代 理 人：朱梅;徐琳

代理机构：北京金信知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及一种基于高通量测序的标记和捕获多个样本的一个或多个特定基因的方法和试剂盒。所述方法包括：第一轮扩增、消化引物、第二轮扩增、混合、回收、测序、分析。在本发明中，第一轮扩增采用通用序列+各个基因的特定引物组成的混合物，此时多重扩增起作用的是每个基因的特定序列，每个基因前面都加上了通用序列；第二轮扩增引物采用标签序列+通用序列，此时扩增起作用的是通用序列，最后的产物前面又都加上了可识别的标签序列。通过对每个样本都引入独特的引物标签序列，使样本在第二代高通量测序技术检测时，每个样本的测序结果都可以通过其独特的引物标签序列找回，可以应用于同时检测大量样本的多个不同基因位点，大大降低了测序成本。

主 权 项：1.一种基于高通量测序的标记和捕获多个样本的一个或多个特定基因的方法，包括以下步骤：第一轮扩增：使用由通用序列和针对特定基因的扩增引物组成的第一轮扩增引物组合对各样本的一个或多个特定基因进行扩增，以使每个基因的扩增产物的两端上都加上了通用序列，其中，所述通用序列中的正向通用序列与反向通用序列彼此不同；消化引物：用单链消化酶消化第一轮扩增产物中剩余的引物和引物二聚体；第二轮扩增：使用由标签序列和通用序列组成的第二轮扩增引物对第一轮扩增得到的产物进行扩增，以使扩增产物的两端都加上与其他样本区分的可识别的标签序列；混合：将各样本的第二轮扩增产物混合在一起；回收：回收所设计的目标区域范围之间的所有DNA条带；测序：将回收的DNA混合物进行测序；分析：基于每个样本独特的标签序列，将获得的测序结果与样本一一对应，以及根据每个基因的引物序列，将序列对应到样本的每个基因上。

关 键 词：通用序列  扩增  样本  标签序列  引物标签  测序 基因 高通量测序技术 高通量测序 测序结果  多个样本  多重扩增  基因位点 扩增引物  特定基因  特定序列  特定引物  同时检测  前面  混合物  第二代  可识别  试剂盒 一种  引物 捕获 独特  找回  混合  消化  回收  引入  检测  应用  涉及  分析  组成  

IPC专利分类号：C12Q1/68(20060101)