文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201610536389.0

申 请 日：20160708

发 明 人：周伟东 邓平 喻运珍 喻婷 张立强 周勇 徐洪亮 艾桃山 林蠡 周裕和

申 请 人：武汉市农业科学技术研究院水产科学研究所

申请人地址：430065 湖北省武汉市江夏区郑店街联合村

公 开 日：20160921

公 开 号：CN105950571A

代 理 人：乔宇;徐晓琴

代理机构：42102 湖北武汉永嘉专利代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法。所述增殖方法为：培养EPC细胞系；用ISKNV感染EPC细胞，恒温培养后收集培养液上清；再用培养液上清中的ISKNV感染EPC细胞，重复操作2～3次，ISKNV毒种复壮后，取培养液上清液氮保存，作为ISKNV扩增毒种；用复壮后的ISKNV毒种感染EPC细胞，恒温培养至CPE>80％，收集上清液，获得ISKNV病毒粒子。本发明以EPC细胞系作为ISKNV感染的敏感细胞，EPC细胞系商品化程度高，易于获得，容易培养，并且和鳜鱼的亲缘关系较远，可大大降低ISKNV用于灭活疫苗时的纯化难度，减少不良反应。

主 权 项：1.一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）EPC细胞的培养：将EPC细胞接种于培养基中，培养至细胞长成单层，细胞数量>10⁶/mL；（2）ISKNV毒种的制备：取EPC细胞，向其中加入含ISKNV病毒的感染液，恒温培养后，收集培养液上清；（3）ISKNV毒种的复壮：另取EPC细胞，向其中加入收集的培养液上清，用培养液上清中的ISKNV病毒感染EPC细胞，恒温培养后，再次收集培养液上清；重复此步骤2~3次；（4）ISKNV毒种经多次复壮后，取培养液上清液氮保存，作为ISKNV病毒扩增毒种；（5）利用ISKNV病毒扩增毒种感染EPC细胞，恒温培养至细胞裂解比例>80%，收集上清液，ISKNV病毒粒子即存在于所述上清液中。

关 键 词：培养液  毒种  感染  复壮  恒温培养  增殖  鳜鱼传染性脾肾坏死病毒  生物技术领域  鳜鱼  病毒粒子  灭活疫苗  敏感细胞 皮瘤细胞  亲缘关系  液氮保存 重复操作  上清液  扩增  鲤鱼 商品化  

IPC专利分类号：C12N7/00(20060101);C12R1/93(20060101)