文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201710017469.X

申 请 日：20170111

发 明 人：杨凯 童金苟 成为为 俞小牧 朱思华 李波 付北德 程颖红 邓国乔 谢德斌

申 请 人：武汉市农业科学技术研究院水产科学研究所 中国科学院水生生物研究所

申请人地址：430000 湖北省武汉市江夏区郑店街

公 开 日：20201215

公 开 号：CN106818552B

代 理 人：傅海鹏

代理机构：11350 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法，包括如下步骤：取斑鳜精液用精子保存液冷冻保存稀释后置于紫外线下照射，使精子遗传失活；失活的精子与翘嘴鳜卵子混合受精，启动卵子雌核发育；卵子受精后转移到淡水中进行冷体克处理，使染色体组加倍，产生异源雌核发育二倍体；将翘嘴鳜雌核发育二倍体卵转入养殖孵化用水中，室温孵化，按普通翘嘴鳜苗培育方法管理，即获得翘嘴鳜雌核发育二倍体鱼苗。本方法诱导产生的翘嘴鳜后代可加速优良基因纯合化，使优良的遗传性状得以迅速固定，抗病力显著增强。该方法条件易得、有助于今后获得生长速度较普通雄性翘嘴鳜快约20％的全雌性翘嘴鳜群体，具有很大的育种潜力和应用价值。

主 权 项：1.一种异源精子诱导翘嘴鳜人工雌核发育的方法，其特征在于，其主要步骤如下：S1：冷冻保存斑鳜异源精子：采用Hanks冷冻稀释液对斑鳜精子在-24°C条件下进行冷冻低温保存，保存期为24h，解冻时，将冷冻精液管在25°C水浴中解冻备用；Hanks冷冻稀释液由以下原料配制而成：KCL 0.4g,NaCL 8.00g，NaHCO3 0.35g，KH2PO4 0.06g，Na2HPO4·7H2O 0.09g,Na2HPO4·12H2O 0.10g,MgSO4·7H2O 0.10g,MgCL2·6H2O 0.10g,CaCL20.14g,Glucose 1.00g；加蒸馏水配至1升；S2：班鳜精子的遗传失活：解冻后的斑鳜精液，按1：4的比例经Hanks冷冻稀释液稀释后放入一个直径10cm的培养皿中，在冰盒上手动摇匀后连同冰盒一起放置在水平摇床上，然后用两根15W UV紫外照射管充分照射25分钟，紫外照射管照射强度为3396 μW(cm³·s)，照射距离17cm；照射后，将灭活的精液虹吸至一个5mL的Ep管中，放入冰盒中保存；S3：获得翘嘴鳜的卵子：2龄以上的性成熟雌鱼通过注射外源催产激素发情后，采用干法将卵子挤入干燥的器皿中，放入冰盒中保存；外源催产激素由以下原料在23℃ ~27℃的温度条件下混合而成：促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)4μg/Kg～6μg/Kg和绒毛膜促性腺激素(HCG)800IU/Kg～1200 IU/Kg；S4：启动卵子雌核发育：将S2得到的遗传失活的斑鳜精子与S3得到的翘嘴鳜成熟卵子摇匀混合受精，受精时间30s；S5：卵子单倍体染色体组加倍：受精后，转移到淡水中进行冷休克处理，水温4°C，冷休克处理时间20～25min，得到二倍体卵，冷休克处理起始时间是在卵子受精后2-3min；S6：将S5所得到的二倍体卵转入方形孵化槽中孵化，水温25°C，按普通翘嘴鳜苗培育方法管理，得到翘嘴鳜雌核发育二倍体鱼苗，二倍体雌核发育鱼苗的诱导率为10～25%；S7：用微卫星标记鉴定雌核发育鱼苗。

关 键 词：翘嘴鳜 雌核发育二倍体 卵子  受精  诱导  精子遗传失活  人工雌核发育 孵化  精子保存液  雌核发育 冷冻保存  染色体组  遗传性状  异源精子  优良基因 育种潜力 抗病力  紫外线  斑鳜 精液  精子  冷体  失活  稀释  异源  鱼苗  照射  后代  转入  生长  群体  养殖  培育  应用  管理  

IPC专利分类号：A01K61/10(20170101)