文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201710773935.7

申 请 日：20170831

发 明 人：赵金银 庞震国 白山 刘琦 李杰 许立志 于闯

申 请 人：大连晶泰生物技术有限公司

申请人地址：116635 辽宁省大连市经济技术开发区先进装备制造业园区金七路9-2号

公 开 日：20210709

公 开 号：CN107338245B

代 理 人：周新楣

代理机构：11732 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明提供了一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法。具体来讲，所述方法包括以下步骤：1)合成可重复生产单链DNA的模板，其中，合成时在所述模板的5’端和3’端分别为启动子序列和一段通用接头序列；2)模板的纯化；3)对步骤2)纯化的模板进行体外转录反应合成RNA；4)以步骤3)中得到的RNA为模板进行逆转录反应合成单链DNA，其中逆转录反应的通用反转录引物为步骤1)所述通用接头序列的互补序列，并且所述通用反转录引物的dTTP核酸被dUTP核酸取代；以及5)使用UDG酶对步骤4)中逆转录反应合成的单链DNA末端带有的通用反转录引物序列进行消化，以对其纯化。

主 权 项：1.一种适用于实验室大规模平行制备单链DNA的方法，所述方法包括以下步骤：1)合成可重复生产单链DNA的模板，其中，合成时在所述模板的5’端和3’端分别为启动子序列和一段通用接头序列，其中，所述模板的特征为长度差别不超过5个碱基，并且任意两个模板序列没有稳定的互补热稳定性结构；2)模板的纯化；3)对步骤2)纯化的模板进行体外转录反应合成RNA；4)以步骤3)中得到的RNA为模板进行逆转录反应合成单链DNA，其中逆转录反应的通用反转录引物为步骤1)所述通用接头序列的互补序列，并且所述通用反转录引物的dTTP核酸被dUTP核酸取代；以及5)使用UDG酶对步骤4)中逆转录反应合成的单链DNA末端带有的通用反转录引物序列进行消化，以对其纯化，其中，在步骤1)中，通过晶芯微阵列基片微量合成单链DNA模板，采用化学合成的单链DNA作为制备所述单链DNA的模板，合成时在其5’端和3’端分别为启动子序列和通用接头序列，并且所述启动子序列和所述通用接头序列如下：启动子序列：5’TGCATAATACGACTCACTATAGGG 3’；通用接头序列：5’GCT TCG GTT CAC GCA ATG3’。

关 键 词：反转录引物  逆转录反应  通用接头  单链DNA 合成  核酸  通用  体外转录反应  启动子序列 互补序列  制备单链  合成RNA  成单链  可重复  逆转录 平行  消化  生产  

IPC专利分类号：C12N15/10(20060101)