文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201711264270.3

申 请 日：20171205

发 明 人：赵俊 王明丽 赵雨 甘霖 王利利 梅志强 蒋敏之

申 请 人：安徽九川生物科技有限公司

申请人地址：241000 安徽省芜湖市经济技术开发区科创中心D园101、102室

公 开 日：20180508

公 开 号：CN108004298A

代 理 人：陈娟

代理机构：11427 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一种荧光素酶报告基因法犬干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：采用PCR扩增获取犬Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒，转染细胞，并选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的犬干扰素α标准品制备标准曲线，将待检犬干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中共孵育，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检犬干扰素α样品的效价。

主 权 项：1.一种荧光素酶报告基因法犬干扰素α生物学活性检测方法，其包括以下步骤：采用PCR扩增获取犬Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将PCR扩增获得的犬Mx1蛋白的pMx1的基因片段插入pGL3-basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1-luc融合基因片段；用pMx1-luc融合基因片段替代pEGFP-N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1-luc质粒；用pMx1-luc质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的犬干扰素α标准品制备标准曲线，确定干扰素效价与荧光值之间的数学逻辑关系；将待检犬干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检犬干扰素α样品的效价。

关 键 词：犬干扰素α  基因片段 融合基因片段  克隆化培养 转染细胞株  荧光素酶报告基因法  生物学活性检测 制备标准曲线  标准曲线  梯度稀释  样品加入  转染细胞 标准品  孵育  构建  效价 荧光  蛋白  筛选  细胞 检测  替代  应用  

IPC专利分类号：C12Q1/66(20060101);G01N21/64(20060101)