文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201810206059.4

申 请 日：20180313

发 明 人：吴宜南 董珣 钟勤 陈军区 叶才文

申 请 人：广州铭康生物工程有限公司

申请人地址：510530 广东省广州市经济技术开发区金峰园路1号

公 开 日：20200814

公 开 号：CN108424897B

代 理 人：张帅

代理机构：44416 广州科沃园专利代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种rhTNK‑tPA细胞收获液的纯化方法。本发明其中一个关键点在于将所述rhTNK‑tPA细胞收获液在进行柱层析前先进行深层过滤和除菌过滤，能够有效地解决以往过滤后柱层析填料容易结块的问题，且滤液澄清度高(≤0.3NTU)，过滤损失小(≤5％)，与现有技术相比取得了显著的进步。

主 权 项：1.一种rhTNK-tPA细胞收获液的纯化方法，其特征在于，将所述rhTNK-tPA细胞收获液在进行柱层析前先进行深层过滤和除菌过滤；所述柱层析还包括以下步骤：A)将过滤后的rhTNK-tPA细胞收获液经Blue Sepharose 6FastFlow亲和柱层析后，用洗脱液Ⅰ洗脱后得到含目标蛋白的洗脱液；B)将经A)步骤处理得到的含目标蛋白的洗脱液进行Lysine HyperD亲和柱层析，用洗脱液Ⅱ洗脱；C)将上述含目标蛋白的洗脱液进行Sephadex G-25凝胶过滤，经洗脱液Ⅲ洗脱后，即得纯化后的rhTNK-tPA；所述洗脱液Ⅰ由以下浓度的组分组成：20mM磷酸盐缓冲液、1M氯化钠溶液、2M尿素和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.0，用量为3.0倍体积；所述洗脱液Ⅱ由以下浓度的组分组成：20mM磷酸盐缓冲液、0.1M 6-氨基正己酸、0.2M精氨酸和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.0，用量为2.0倍体积；所述洗脱液Ⅲ由以下浓度的组分组成：0.2M精氨酸和0.04％吐温80，洗脱液的pH值为7.2，用量为1.5倍体积；所述步骤B)和步骤C)调换顺序；所述纯化后的rhTNK-tPA纯度为99.3％，回收率为96.5％，比活性为625000IU/mg。

关 键 词：细胞收获  过滤  层析填料  除菌过滤  蛋白分离  深层过滤  澄清度 关键点  有效地  柱层析 后柱 结块  

IPC专利分类号：C12N9/48(20060101)