文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201810434795.5

申 请 日：20180509

发 明 人：汤华东 赵舟宙 万滔 杨薇 吴红梅 曾凡星 柳余莉 樊薇 杨琴霞 陈亚

申 请 人：武汉海特生物制药股份有限公司

申请人地址：430056 湖北省武汉市经济技术开发区海特科技园(珠山湖大道66号)

公 开 日：20181002

公 开 号：CN108610398A

代 理 人：董佳佳;卢鼎

代理机构：11228 北京汇泽知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一段功能序列及在分泌蛋白表达中的应用。该功能序列的氨基酸从N端到C端依次由神经生长因子信号肽(NGFSP)、GNT、Linker和改造的分泌蛋白前导肽序列(Pro_mdf)连接而成；还可以在Linker和Pro_mdf之间插入Tag和Linker以提高纯化工艺收率。本发明利用神经生长因子信号肽与GNT序列的组合，可强效地引导分泌蛋白泌出细胞外，提高了分泌蛋白表达量。Pro_mdf消除了PC酶切割位点，绕开了分泌蛋白在体外表达时因前导肽切除效率低导致的表达产物不均一的问题，所得表达产物均一，表达量高。所得原蛋白经位点特异性蛋白酶酶切后，可获得高产量和高得率的目的蛋白。

主 权 项：1.一段功能序列，其特征在于，氨基酸序列从N端到C端依次由：NGF SP、GNT、Linker和Pro_mdf连接而成；所述NGF SP的氨基酸序列为：MSMLFYTLIT(A/V)(F/L)LIG(I/V)QA，其中第11位氨基酸为丙氨酸(A)或缬氨酸(V)，第12位氨基酸为苯丙氨酸(F)或亮氨酸(L)，第16位氨基酸为异亮氨酸(I)或缬氨酸(V)；所述GNT的氨基酸序列为：H(G/A)EGTFTSD(V/L)S(S/K)的前6～12个氨基酸序列，其中，第2位氨基酸为甘氨酸(G)或丙氨酸(A)，第10位氨基酸为缬氨酸(V)或亮氨酸(L)，第12位为丝氨酸(S)或赖氨酸(K)；所述Linker的氨基酸序列为：含有甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、丙氨酸(A)和苏氨酸(T)中至少1个氨基酸，序列长度不多于20个氨基酸；所述Pro_mdf的氨基酸序列含有位点特异性蛋白酶切割序列，不含前体蛋白转化酶切割序列。

关 键 词：分泌蛋白 神经生长因子  表达产物  功能序列  表达量  信号肽 均一  蛋白酶  前导肽序列  位点特异性 目的蛋白 体外表达 酶切割  前导肽 原蛋白  氨基酸  得率  酶切  绕开  收率  位点 切除  细胞  应用  改造  

IPC专利分类号：C07K14/00(20060101);C07K19/00(20060101);C12N15/62(20060101);C12N15/85(20060101);C12N5/10(20060101)