文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201910096059.8

申 请 日：20190131

发 明 人：肖文谦 曲晓航 李加乐 谭云飞 李波

申 请 人：重庆科技学院

申请人地址：401331 重庆市沙坪坝区大学城东路20号

公 开 日：20220419

公 开 号：CN109810267B

代 理 人：郑勇

代理机构：重庆蕴博君晟知识产权代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开了一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，包括如下步骤：1)材料的灭菌：2)将丝素蛋白溶液、改性透明质酸溶液混合形成预聚物溶液，向预聚物溶液中加入光引发剂；3)超声处理步骤2)所得的预聚物溶液，超声后溶液具有流动性且呈半透明状；4)经步骤3)处理所得溶液与细胞混合均匀得细胞预聚溶液，进一步将细胞预聚溶液加入细胞培养板中；5)将步骤4)所得培养板放在紫外光下进行光交联成胶，然后放置在37℃恒温箱中，至预聚溶液变成乳白色后即制得。利用本方法能够实现细胞在高强、高韧的双网络水凝胶中的三维培养，有利于类似软骨等承重软组织组织在体外的三维构建。

主 权 项：1.一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)使用高温高压法对丝素蛋白溶液和改性透明质酸溶液进行灭菌处理，步骤1所述高温高压的条件为120℃、0 .25MPa ,灭菌时间为20min；2)将丝素蛋白溶液、改性透明质酸溶液混合形成预聚物溶液，并添加光引发剂；3)超声处理步骤2)所得的预聚物溶液，超声后溶液具有流动性且呈半透明状；4)将经步骤3)所得溶液与细胞混合均匀得到细胞预聚溶液；5)将细胞预聚溶液加入细胞培养板中，在紫外光下进行光交联成胶，然后放置在37℃恒温箱中，至预聚溶液变成乳白色后即制得；步骤1)所述丝素蛋白依次采用了脱胶、溶解、透析、浓缩的分离提 纯工艺，具体流程为：1）脱胶：采用碱煮法对家蚕蚕丝进行脱胶处理：取1g无水碳酸钠加入2L的蒸馏水中溶解，加热至溶液沸腾后放入20g蚕丝，在溶液持续沸腾下用玻璃棒不断搅拌，0.5h后取出蚕丝，用去离子水清洗10次以上；更换2L去离子水，提升Na2CO3溶液浓度至1w/v%，将洗好的蚕丝放入其中继续沸腾搅拌煮0.5h，取出蚕丝再次用去离子水反复清洗，最后风干备用；2）溶解：采用高浓度溴化锂溶液对脱胶蚕丝进行溶解，且脱胶蚕丝的质量与溶液的体积比为4:25：称取4g脱胶蚕丝和21g溴化锂粉末，将21g溴化锂溶于25mL去离子水中，待溴化锂完全溶解并释放大量热的同时，将4g脱胶蚕丝加入到该溶液中，待蚕丝整体溶解后，将其放在60℃烘箱内20min，维持一定温度以确保蚕丝完全溶解；3）透析：利用截留分子量为3500D的透析袋，并在4℃的条件下透析：将溶解后的丝素蛋白倒入截留分子量为3500D的透析袋中，并将其放入去离子水中，每天更换5次去离子水，透析3天即可；4）浓缩：利用高浓度的聚乙二醇溶液进行浓

关 键 词：预聚物溶液  细胞 预聚溶液  双网络水凝胶  三维  超声处理步骤  改性透明质酸  丝素蛋白溶液  细胞培养板  软组织  紫外光  半透明状  光引发剂  溶液混合  三维培养  丝素蛋白 透明质酸 承重  恒温箱 培养板  灭菌  软骨  乳白色  超声 构建  体外  制备  装载  

IPC专利分类号：C08J3/075;C08J3/24;C08L89/00;C08L5/08;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/52