文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201910675575.6

申 请 日：20190725

发 明 人：王剑 付远飞 李亚飞 蓝华全 张文静

申 请 人：广州中医药大学(广州中医药研究院)

申请人地址：510006 广东省广州市番禺区大学城外环东路232号

公 开 日：20230707

公 开 号：CN110283787B

代 理 人：胡济元

代理机构：广州市天河庐阳专利事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及一种树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将肿瘤细胞体加入含血清的培养液中，再加入桔梗皂苷D培养液，置入二氧化碳培养箱中培养2h以上；(2)将经步骤(1)培养的肿瘤细胞用胰蛋白酶消化，离心，弃去培养液，加入DMEM重悬，然后加入树突状细胞共同培养2h以上，加入脂多糖LPS继续培养使树突状细胞变为悬浮状态；(3)吸出悬浮的树突状细胞，离心，弃去培养液，加入DMEM重悬，再分选纯化，得到成熟的树突状细胞；(4)取成熟的树突状细胞加入等渗的生理盐水或磷酸盐缓液或不含血清的DMEM制得树突状细胞肿瘤疫苗。本方法所制得的肿瘤疫苗可促进肿瘤抗原的免疫应答，抗肿瘤的效果显著。

主 权 项：1.一种树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）将肿瘤细胞体加入含血清的DMEM或RPMI-1640细胞培养液中，再加入等体积的桔梗皂苷D浓度为5~10uM的培养液，置入二氧化碳浓度为5%的培养箱中，于37℃的条件下培养2h以上；（2）将经步骤（1）培养的肿瘤细胞用胰蛋白酶消化，然后按肿瘤细胞数︰树突状细胞数=1︰5～5︰1的比例加入使用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素-4联合诱导后的树突状细胞共同培养2h以上，加入脂多糖浓度为100~300ng/ml的 LPS继续培养，使树突状细胞由贴壁状态变为悬浮状态；（3）吸出悬浮的树突状细胞，1000g离心，弃去培养液，加入DMEM重悬，再用磁式细胞分选术或流式分选术分选纯化，得到成熟的树突状细胞；（4）取成熟的树突状细胞加入等渗的生理盐水或磷酸盐缓冲液或不含血清的DMEM细胞培养液，使成熟的树突状细胞浓度为50万-500万个/ml，即得所述的树突状细胞肿瘤疫苗。

关 键 词：树突状细胞 培养液  肿瘤疫苗 血清  重悬  二氧化碳培养箱  胰蛋白酶消化  磷酸盐缓液  肿瘤细胞体  桔梗皂苷D 免疫应答  生理盐水  悬浮状态  肿瘤抗原 肿瘤细胞  抗肿瘤  脂多糖 状细胞  等渗 分选  吸出  置入  成熟  制备  悬浮  

IPC专利分类号：C12N5/0784;A61K39/00;A61P35/00