文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201911265644.2

申 请 日：20191211

发 明 人：梁军 景奉香 吴东平

申 请 人：上海小海龟科技有限公司

申请人地址：200439 上海市宝山区一二八纪念路968号1205室A区1028室

公 开 日：20200403

公 开 号：CN110951857A

代 理 人：成丽杰

代理机构：31260 上海晨皓知识产权代理事务所(普通合伙)

语　　种：中文

摘　　要：本发明提供了一种基于数字PCR无创产前筛查21、18、13三体综合征的方法及试剂盒。本发明根据人类第21、18、13号染色体基因序列设计扩增引物和taqman探针，检测目标基因；同时，根据人类第2、8号染色体基因序列设计扩增引物和taqman探针，检测参照基因；并基于数字PCR技术和数据分析，得出待测样本的21、18和13号染色体数目是否存在异常的检测结果。本发明所提供的检测方法相比于二代测序，操作简单、无需建库和测序等步骤，数据分析简单易学，大规模检测速度快，且检测成本较低，便于常规临床实验室开展。

主 权 项：1.一种基于数字PCR无创产前检测胎儿21、18、13三体综合征的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从待测样本孕妇外周血中获得游离DNA，作为待测基因组DNA；(2)选择人类第21号、第18号和第13号染色体的检测位点，分别设计用于扩增和检测目标染色体的特异性引物和Taqman探针；选择人类第8号、第2号染色体的检测位点，分别设计用于扩增和检测参照染色体的特异性引物和Taqman探针；其中，所述用于扩增和检测目标染色体的特异性引物和Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：36所示；所述用于扩增和检测参照染色体的特异性引物和Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：37～SEQ ID NO：48所示；(3)配制数字PCR扩增反应体系，以步骤(1)所述的待测基因组DNA为模板，利用步骤(2)所述的特异性引物和Taqman探针进行数字PCR扩增和检测；(4)根据数字PCR的荧光信号，分别得到待测样本的第21号染色体的拷贝数a₂₁、第18号染色体的拷贝数a₁₈、第13号染色体的拷贝数a₁₃和参照染色体的拷贝数b；其中，参照染色体的拷贝数b为待测样本的第2号染色体的拷贝数b₂和第8号染色体的拷贝数b₈的平均值；(5)分别计算待测样本第21号染色体的拷贝数a₂₁、第18号染色体的拷贝数a₁₈、第13号染色体的拷贝数a₁₃占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比y₂₁、y₁₈和y₁₃；(6)分别计算待测样本的第21号、第18号和第13号染色体的Z-score：(Z-score)₂₁＝(y₂₁-m)/σ_m；(Z-score)₁₈＝(y₁₈-n)/σ_n；(Z-score)₁₃＝(y₁₃-p)/σ_p；其中，m为三体综合征阴性样本的第21号染色体的拷贝数a₂₁占该样本参照染色体的拷贝数b的百分比的平均值；n为三体综合征

关 键 词：检测  数据分析  数字PCR  测序  设计扩增引物  染色体基因  产前筛查 待测样本  基因序列 检测结果  扩增引物  目标基因  序列设计  试剂盒 综合征  染色体 建库 无创  基因  

IPC专利分类号：C12Q1/6883(20180101);C12Q1/686(20180101);C12N15/11(20060101)