文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN201911381138.X

申 请 日：20191227

发 明 人：赵金银 李宏志 刘琦 李杰

申 请 人：大连晶泰生物技术有限公司

申请人地址：116635 辽宁省大连市金州新区先进装备制造业园区金七路9号

公 开 日：20230725

公 开 号：CN110964826B

代 理 人：周莹; 李馨

代理机构：大连东方专利代理有限责任公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明属于生物技术领域，具体是一种结直肠癌抑癌基因甲基化高通量检测试剂盒及其应用。试剂盒包括序列如SEQ ID NO：1～20所示的甲基化特异性多重PCR扩增引物和序列如SEQ ID NO：21～41所示的标签引物。本发明能够一次性捕获一个或多个基因的目标甲基化检测区域，获得样本一个或多个基因目标区域甲基化突变序列信息，能够准确有效分析目标区域甲基化状态，使得对目标基因区域进行高通量、高灵敏度、高准确度的甲基化检测成为现实，该方法还具有成本低、操作简便快捷等技术特点，仅通过两轮PCR就可以完成样本文库构建。

主 权 项：1.一种一次性捕获一个或多个基因目标甲基化检测区域的高通量测序文库的构建方法，其特征在于，所述方法应用结直肠癌抑癌基因甲基化高通量检测试剂盒进行两轮PCR扩增；第一轮甲基化特异性多重PCR扩增：使用所述试剂盒中甲基化特异性多重PCR扩增引物对各样本的一个或多个特定基因甲基化检测区域进行扩增；第二轮富集扩增：使用所述试剂盒中标签引物对第一轮扩增得到的产物进行扩增；所述试剂盒包括以下成分：（1）10对甲基化特异性多重PCR扩增引物；第1对：SEPT9甲基化特异性多重PCR扩增引物对SEPT9-F1：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTTGGTGGGGGTGTTAGTTGTSEPT9-R1：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTACAACCAAACAAAATTCTCTATCAC第2对：SEPT9甲基化特异性多重PCR扩增引物对SEPT9-F2：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTTTTATTTAGTTGAGTTAGGGGGTTTASEPT9-R2： TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTAACCCAACACCCACCTTC第3对：WNT2甲基化特异性多重PCR扩增引物对WNT2-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTGGAATTTTTAGGGAAGTTTTAGGTTAAAGWNT2-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTTACAAATACTAACTCTTCATCCCAACTTC第4对：VIM甲基化特异性多重PCR扩增引物对VIM-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTAGTTTTAGGTTTYGGAGTAGGAAGGTTVIM-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTAAAATCCCCTCCCACTACCAT第5对：P16甲基化特异性多重PCR扩增引物对P16-F ：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTAGGGGTTGGTTGGTTATTAGP16-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCCCTCTACCCACCTAAATC第6对：MGMT甲基化特异性多重PCR扩增引物对MGMT-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTGATTATTTTTGTGATAGGAAAAGGTAMGMT-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTACCTAAAACAATCTACGCATCC第7对：NDRG4甲基化特异性多重PCR扩增引物对NDRG4-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTCGGTTTTCGTTCGTTTTTTCNDRG4-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCCTCGAGCGTAACTTCCG第8对：SFRP2甲基化特异性多重PCR扩增引物对SFRP2-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATCTGGGAGGAGTTAATGAAGGGTAATSFRP2-R：TTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTACTCATACCTAACAACCCAACAAAA第9对：SDC2甲基化特异性多重PCR扩增引物对SDC2-F：CCTACACGACGCTCTTCCGATC

关 键 词：甲基化检测 多个基因  目标区域  甲基化 试剂盒  样本  甲基化特异性 目标基因区域  生物技术领域  多重PCR扩增  高通量检测  甲基化状态  标签引物  高灵敏度  技术特点  结直肠癌 突变序列  文库构建 抑癌基因 有效分析  准确度  高通量 一次性  引物  捕获  应用  

IPC专利分类号：C12Q1/6886; C12Q1/6806; C12Q1/6869