文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN202110722649.4

申 请 日：20210629

发 明 人：邹检平 赵立哲 陈卓 王磊

申 请 人：北京健平金星生物科技有限公司

申请人地址：100094 北京市海淀区永丰路5号院2号楼2层201-1房间

公 开 日：20211126

公 开 号：CN113702642A

语　　种：中文

摘　　要：本发明涉及血管内皮生长因子检测技术领域，且公开了一种血管内皮生长因子检测试剂盒的原料制备及检测方法，其包括原料制备，所述原料制备包括抗体包被磁珠工作液、VEGF标记抗体、VEGF校准品、VEGF质控品、样品稀释液；所述抗体包被磁珠工作液为包被人源化VEGF抗体Fab段的磁性微球悬液，缓冲体系为TBS‑T(20‑200mM Tris，0‑1M NaCl，0.0％‑1％BSA，0.1％‑0.5％Tween‑20，0.1％‑1％Proclin‑300，pH 6.5‑9.0)。本发明选择的发光标记物是吖啶盐NSP‑SA‑NHS。以便发光检测在均相液体中进行且缩短反应时间。与此同时，C‑N的键级大于C‑O，吖啶盐NSP‑SA‑NHS与蛋白的偶联物稳定性更高。基于NSP‑SA‑NHS的使用，提升了检测系统的灵敏度、检测范围以及保存时间并缩短了反应时间。

主 权 项：1.一种血管内皮生长因子检测试剂盒的原料制备方法，其特征在于，包括：抗体包被磁珠工作液、VEGF标记抗体、VEGF校准品、VEGF质控品和样品稀释液；所述抗体包被磁珠工作液为包被人源化VEGF抗体Fab段的磁性微球悬液，缓冲体系为TBS-T(20-200mM Tris，0-1M NaCl，0.0％-1％BSA，0.1％-0.5％Tween-20，0.1％-1％Proclin-300，pH 6.5-9.0)，制备方法为取磁珠母液200μl，重悬后加入0.1M硼酸盐缓冲液和重组VEGF抗体Fab段200μg振荡混匀，且磁珠为甲苯磺酰活化的磁珠；所述VEGF标记抗体通过吖啶酯修饰物对人源化VEGF抗体Fab段进行标记，标记物为吖啶盐NSP-SA-NHS或其他吖啶酯衍生物，制备方法为取1mg重组VEGF抗体Fab段用CBS缓冲液稀释至2mg/ml，加入5mM NSP-SA-NHS溶液，搅拌均匀后经过反应得到标记物，加入200μl5％DL-赖氨酸后使用Sephadex G-25脱盐，洗脱缓冲体系为TBS-T(20-200mM Tris，0-1MNaCl，0.0％-1％BSA，0.1％-0.5％Tween-20，0.1％-1％Proclin-300，pH 6.5-9.0)；所述VEGF校准品校准品和所述VEGF质控品均由样品稀释液配制而成，所述VEGF校准品校准品的浓度范围为0.5-50000pg/mL，所述VEGF质控品的浓度为200pg/ml，400pg/ml和4000pg/ml；所述样品稀释液为pH 6.5-9.0的PBS缓冲液，且每升样品稀释液还含有5-20g BSA和1-10ml Proclin-300。

关 键 词：原料制备  血管内皮生长因子 抗体包被磁珠  工作液  吖啶 检测技术领域  发光标记物  样品稀释液  标记抗体 磁性微球 发光检测  缓冲体系  检测试剂  检测系统  灵敏度  偶联物  人源化  校准品 质控品 检测  包被  悬液  蛋白  保存  

IPC专利分类号：G01N33/68(20060101);G01N33/574(20060101);G01N33/543(20060101);G01N33/532(20060101);G01N33/531(20060101);G01N21/76(20060101)