文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN202010360644.7

申 请 日：20200430

发 明 人：刘文 张庆林 冯俊寅 潘佳明 陈单丹 王杰

申 请 人：中国科学院上海有机化学研究所 中国科学院上海有机化学研究所湖州生物制造创新中心

申请人地址：200032 上海市徐汇区零陵路345号

公 开 日：20211102

公 开 号：CN113584068A

代 理 人：肖艳;徐迅

代理机构：31266 上海一平知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明提供了一种VWB‑attP和φC31‑attP整合酶介导的基因重组方法及在链霉菌中应用。具体地，本发明利用VWB‑attP整合酶和φC31‑attP整合酶系统介导的位点特异性整合机制将这两种整合酶模块构建在同一个含有目的基因的质粒中，通过属间接合转移可快速将需要表达的目的基因以多拷贝的数量重组至链霉菌染色体的相应attB位点上。本发明的方法在阿维菌素，红霉素和林可霉素产生菌中进行了应用。

主 权 项：1.一种利用VWB-attP和φC31-attP整合酶介导的基因重组方法，其特征在于，包括步骤：(1)在链霉菌的基因组中引入至少1个外源的attB位点，获得携带有外源attB位点的链霉菌；(2)将包含(i)ΦC31整合酶模块和/或VWB整合酶模块、和(ii)目的基因或目的基因簇的载体引入到步骤(1)的链霉菌中，选择目标基因或目标基因簇整合到链霉菌基因组内源attB位点以及外源attB位点的链霉菌，从而获得整合入多拷贝基因或基因簇的链霉菌。

关 键 词：整合酶 目的基因 介导 林可霉素产生菌  位点特异性整合  链霉菌染色体  红霉素  阿维菌素  基因重组 模块构建  多拷贝 链霉菌 位点  质粒  应用  

IPC专利分类号：C12N15/76(20060101);C12N15/74(20060101);C12N1/21(20060101);C12N15/52(20060101);C12R1/565(20060101);C12R1/465(20060101);C12R1/01(20060101)