文献类型：专利

专利类型：发明专利

是否失效：否

是否授权：否

申 请 号：CN03134768.1

申 请 日：20030929

发 明 人：马骉 魏化伟 吴丹 宋梦薇 张颖

申 请 人：北京赛生药业有限公司

申请人地址：100078 北京市经济技术开发区兴盛街8号

公 开 日：20050406

公 开 号：CN1603405A

代 理 人：徐金国;梁挥

代理机构：11006 北京律诚同业知识产权代理有限公司

语　　种：中文

摘　　要：本发明公开一种高纯度蚓激酶的制备方法及以其为原料药的制剂。本发明通过采用单克隆抗体技术实现蚓激酶活性组分的再纯化，从而得到高纯度蚓激酶，该方法的特点是所获酶的专一性强，活性高，达到每毫克蛋白20万单位以上；经高效液相色谱测试为单一组分；在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现一条带，分子量为32000±2000道尔顿；氨基酸序列分析，N－末端10个氨基酸序列为：Ile－Val－Gly－Gly－Ile－Glu－Ala－Arg－Pro－Tyr，以所述高纯度蚓激酶为原料药可以制成可供口服、肌注、以及静脉注射与静脉输液多种途径给药的制剂，用于血栓性疾病的治疗。

主 权 项：1.一种高纯度蚓激酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蚓激酶粗品的提取：取鲜活蚯蚓用水洗净，加入食盐处理；加入pH6.8～8.3的缓冲液，用胶体磨制备匀浆；将匀浆液反复冻融；将匀浆液加热，去除对热不稳定的杂蛋白；将匀浆液离心，取上清液；上清液经超滤浓缩，截留分子量为10000～50000道尔顿的组分，冷冻干燥制得蚓激酶粗品；(2)蚓激酶粗品的纯化：将步骤(1)中获得的蚓激酶粗品溶于缓冲液中，离心，取上清液用离子交换层析柱分离，得到蚓激酶活性组分；(3)蚓激酶活性组分的再纯化：将步骤(2)中的蚓激酶活性组分用亲和层析平衡缓冲液溶解，用单克隆抗体亲合层析柱进行再纯化，用缓冲液平衡至流出液在蛋白检测仪上绘出稳定的基线后，再用含有洗脱剂的亲和层析洗脱液洗脱，收集活性洗脱峰，冷冻干燥得到高纯度的蚓激酶。

关 键 词：激酶 高纯度  原料药  聚丙烯酰胺凝胶电泳 氨基酸序列分析 静脉注射  高效液相色谱  单克隆抗体  血栓性疾病 激酶活性 技术实现  静脉输液  制备方法  专一性  氨基酸 给药  条带  蛋白  

IPC专利分类号：C12N9/48;A61K38/48;A61P7/02