文献类型：会议

作　　者：李丽 林建平 傅维琦 岑沛霖

作者单位：浙江大学化学工程与生物工程学系生物工程研究所,杭州310027

会议文献：第五届全国化学工程与生物化工年会论文集

会议名称：第五届全国化学工程与生物化工年会

会议日期：20081001

会议地点：西安

主办单位：中国化工学会,陕西省化工学会

出版日期：20080100

语　　种：中文

摘　　要：本文从Rhodococcus erythropolis DSM 43297(ATCC 17896)克隆ADH基因(1047bp )，用LA Taq聚合酶PCR扩增，直接与T载体pMD 19-T Simple Vector连接，构建TA克隆质粒。然后用限制性内切酶EcoR I和Hind III双酶切，目的片段纯化后连接到pET-28a表达载体上，成功构建了重组大肠杆菌E. coliBL21(DE3)/pET 28a-RE ADH。重组的E. coli BL21在LB培养基中经IPTG诱导后30℃，200 rpm继续培养14h收集菌体，提取粗酶液。以苯乙酮为底物，粗酶液的比酶活为127U/mg。经65℃热水浴处理15 min后去除80%的杂蛋白；再经亲和层析和凝胶过滤层析纯化最后获得冻干粉纯度达到90%以上，纯化倍数为8.0。 FDH由本实验室已构建的重组菌生产，将ADH和FDH按1：1比例混合，加入少量的NAD十，可以专一性催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原得到手性单体(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，对映体过量率(e.e.)较高，且FDH催化NADH再生的方式大大减少了成本，工业化应用潜力大大提高。

关 键 词：(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯  合成工艺 脱氢酶 耦联体系

分 类 号：TQ225.242]