文献类型：会议

作　　者：张梅英 郑志红 任萍萍 徐影琪 王惟 赵越 杨葳 于萌 郭晓冲 秦英

作者单位：中国医科大学病理学与病理生理学研究室,沈阳 110001 中国医科大学实验动物部辽宁省转基因动物研究重点实验室,沈阳 110001

会议文献：2014第十一届中国实验动物科学年会论文集

会议名称：2014第十一届中国实验动物科学年会

会议日期：20140625

会议地点：长春

主办单位：中国实验动物学会

出版日期：20140625

语　　种：中文

摘　　要：目的 在细胞学水平比较DJ、DJ-1M26I 、DJ-1L166P基因对NIH 3T3细胞增殖速率与凋亡的关系,为建立转基因动物模型及帕金森疾病发病机制研究奠定基础.方法 分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1 、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcD-NA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒脂质体方法转染NIH 3T3细胞,500μg/ml G418压力筛选稳定克隆,对3种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和Annexin V-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测.结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个、4个、3个阳性细胞克隆,RT-PCR及Western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,Caspase-3 RNA水平检测DJ-1L166P和DJ-1M261组表达高于正常NIH 3T3细胞组,而D J-1组caspase-3转录水平相对最低,MTT实验结果初步证明转染DJ-1 L166P和DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率均低于DJ-1组和正常NIH 3T3细胞组(P＜0.05),转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞增殖速率与正常NIH 3T3细胞相比无明显差别；细胞凋亡检测表明转染D J-1L166P和DJ-1 M26I基因的NIH3T3阳性细胞凋亡率均高于正常NIH 3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞凋亡率低于正常NIH T3细胞(P0.05).结论 DJ-1L166P和DJ-1M26I基因突变均降低NIHT3细胞增殖速率,DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变更易导致NIH T3细胞的凋亡,DJ-1L166P和DJ-1M26I基因突变对NIH T3细胞增殖速率和细胞凋亡影响是相似的.

关 键 词：DJ-1 NIH3T3细胞 帕金森 凋亡

分 类 号：J0-[艺术学理论类] R74[临床医学类]