文献类型：学位论文

作　　者：李冰

授予单位：中国科学院上海生命科学研究院上海巴斯德研究所 中国科学院上海生命科学研究院 中国科学院巴斯德上海研究所

学科专业：抗病毒免疫与遗传治疗

授予学位：博士后

学位年度：2007

语　　种：中文

摘　　要：HIV通过皮肤表面和黏膜表面两种途径进入细胞。皮肤表面和黏膜表面均有极性上皮细胞覆盖。病毒虽然不通过感染这些上皮细胞传播，但会被内吞至这些上皮细胞中并通过跨胞运输作用穿过上皮细胞屏障。因此，急需开找到一种能够有效阻止HIV跨胞运输的方法。在本课题中，一个非中和的抗HIV表面gp41单链抗体与GPI锚定信号连接形成GPI-mscFv。在CEMss(T细胞系)中表达GPI-scFv，并将其分离纯化。这个纯化的GPI-scFv再重新嵌入至Caco-2(上皮细胞系)质膜表面，尤其是嵌入至HIV跨胞运输发生的部位——脂筏上。Caco-2细胞被培养在能够模拟自然条件下极性顶膜和基底膜环境的transwell中。GPI-scFv分子嵌入Caco-2细胞后，以Bru-Yu长期感染的CEMss细胞加入到Transwell上层用作感染。经过固定时间间隔(0，1，3，5，7小时)，在transwell上层及下层的上清被收集，并测定其中p24来量定HIV的含量。实验结果显示：GPI-scFv分子能够成功嵌入至Caco-2细胞表面，与对照相比，能够抑制HIV跨胞运输10倍以上。在GPI-scFv嵌入2.5小时后，Caco-2细胞被HIV感染，这个“延时感染”实验结果证明这时的GPI-scFv同样可以抵抗HIV的跨胞运输。这样，当这非中和的抗体通过GPI锚定在多种HIV易感细胞表面之后，就转变成了中和抗体。该项研究可能为将来新型的阻止HIV传播的杀微生物剂的开发带来希望。

关 键 词：HIV跨胞运输  GPI锚定信号  单链抗体 CACO-2细胞 中和抗体

分 类 号：R512.91] R392.11[临床医学类]