文献类型：期刊文章

作　　者：魏婧[1,2] 郑如明[1,2] 李康生[1,2] 李柏青[1,2,3] 许涛[1,2,3,4] 汪洪涛[1,2,3]

WEI Jing;ZHENG Ruming;LI Kangsheng;LI Baiqing;XU Tao;WANG Hongtao(Laboratory Medicine Experimental Center,Laboratory Medicine College,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Anhui Province Key Laboratory of Immunology in Chronic Diseases,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Department of Immunology,Laboratory Medicine College,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China;Department of Clinical Laboratory and Diagnostics,Laboratory Medicine College,Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China)

机构地区：[1]蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心,蚌埠233030 [2]蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室,蚌埠233030 [3]蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室,蚌埠233030 [4]蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室,蚌埠233030

出　　处：《生命的化学》

基　　金：安徽省自然科学基金项目(1908085MH252,2008085QH405);慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室开放课题基金项目(KLICD-2002-Z3);呼吸系病临床基础安徽省重点实验室开放课题基金项目(HX2022-Z02);蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309)

年　　份：2023

卷　　号：43

期　　号：2

起止页码：286-295

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得HspX基因,通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中,构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3),采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导HspX蛋白表达。使用Ni-IDA亲和层析柱纯化目的HspX蛋白,透析去除咪唑,通过Western blot检测HspX抗原特异性。最终确定表达重组蛋白HspX的最佳诱导条件为:诱导温度37℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导时间8 h。结果表明,获得了高纯度和被特异性识别的可溶性Hsp X蛋白,为未来Hsp X蛋白用于结核病诊断试剂和疫苗奠定基础。

关 键 词：结核分枝杆菌 HSPX 原核表达 纯化 条件优化  

分 类 号：R378.911]