文献类型：期刊文章

作　　者：崔晓东[1] 范鑫[1] 闫红[1] 王转花[2] 李晨[2]

CUI Xiaodong;FAN Xin;YAN Hong;WANG Zhuanhua;LI Chen(Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering of Ministry of Education,Institute of Biotechnology,Shanxi University,Taiyuan 030006,China;Department of Bioengineering,School of Life Sciences,Shanxi University,Taiyuan 030006,China)

机构地区：[1]化学生物学与分子工程教育部重点实验室,山西大学生物技术研究所,山西太原030006 [2]山西大学生命科学学院生物工程系,山西太原030006

出　　处：《山西大学学报（自然科学版）》

基　　金：国家自然科学基金(31600631);山西省应用基础研究计划项目(201801D121192);山西省高等学校科技创新项目(201802020)

年　　份：2021

卷　　号：44

期　　号：4

起止页码：815-823

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2020、CAS、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZMATH、核心刊

摘　　要：重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI)是一种来源于荞麦的Potato I型蛋白酶抑制剂,可以抑制多种肿瘤细胞的增殖。先前研究证明,r BTI可以靶向线粒体,诱导线粒体自噬,进而抑制细胞增殖,但是其肿瘤抑制活性与其胰蛋白酶抑制活性位点无关。rBTI分子中α-螺旋与线粒体蛋白的前导肽序列相近,因此文章将研究rBTI的抗肿瘤效应与rBTI的分子中α-螺旋的关系。文章对rBTI的α-螺旋中两个碱性氨基酸(赖氨酸,K)进行了突变,并对其突变体的抗肿瘤效应进行了比较。以pExSecI-BTI质粒为模板,通过定点突变技术,分别将螺旋区第20位、23位赖氨酸分别或同时突变为丙氨酸。采用MTT实验、ATP实验、免疫荧光技术等测定了rBTI及其突变体对Hep G2细胞增殖,ATP含量变化及对线粒体形态的影响。研究发现,r BTI及三种突变体均对Hep G2细胞有较强的增殖抑制作用,同时可引起细胞内ATP含量显著下降,其中rBTI-K20A和rBTI-K23A的抑制效果最为显著,但是突变体的胰蛋白酶抑制活性都未发生改变。免疫荧光分析表明,rBTI及突变体,尤其是rBTIK20A和rBTI-K23A作用后,Hep G2细胞中线粒体数量显著降低。同时人工合成相应的rBTI的α-螺旋多肽,也发现上述类似现象。我们得出α-螺旋是r BTI发挥抗肿瘤活性的区域,其20位和23位的赖氨酸可能发挥重要作用。

关 键 词：重组荞麦胰蛋白酶抑制剂  Α-螺旋 细胞活力 抗肿瘤效应 线粒体形态

分 类 号：R965]